9.2.1 Físicos
Los métodos físicos utilizan
técnicas como la microinyección con una fina aguja de cristal y la electroporación.
La microinyección resulta
ser una técnica muy potente y eficaz, ya que 1 de cada 5 células consigue
incorporar el DNA foráneo de forma permanente. El problema de esta técnica es
que exclusivamente se puede inyectar una célula cada vez, y por tanto no es el
más recomendable para una terapia médica debido a que es demasiado laboriosa
como para obtener un número de células indicadas para que el tratamiento tenga
éxito.
Es una técnica muy efectiva
aunque laboriosa. Es el método que se emplea en la introducción del DNA
recombinante en las células embrionarias en el proceso de obtención de animales
transgénicos.
La electroporación es una técnica que
crea o que dota a la membrana de cierta permeabilidad al DNA durante unos pocos
segundos debido a una descarga eléctrica. Si la célula o grupo de células
sometidas, a dicho choque eléctrico están sumergidas en un medio rico en
plásmidos, alguno de ellos puede penetrar en una célula. El problema que
suscita este método es que los choques eléctricos no pueden producir los
efectos deseados en algunas células y dañarlas o matarlas debido a esta causa.
Una vez introducida la molécula
de DNA recombinante en el interior de las células producirá su efecto
permitiendo, por ejemplo :
- Seleccionar células que hayan incorporado el DNA. Este sería el caso del aislamiento de clones celulares que presentaran expresión de un determinado producto. Es posible por la incorporación en el propio vector de marcadores de selección, típicamente la resistencia de G418.
- A las pocas horas o dias detectar la presencia de
la proteína codificada por el plásmido.
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